接下來,隨著鹽濃度提升到0。3m、0。4m,收集到的餾分體積略有增加,顏色也稍明顯了些,但依舊遠談不上富集。
直到切換到含0。5mnacl的緩沖液時,情況發生了變化。
第十一和第十二支試管里接到的液體,明顯變得渾濁了一些,呈現出淡淡的乳黃色,體積也比之前多了幾毫升。
沈慕的心跳微微加速。
她小心地將這兩支試管的液體合并到一個更干凈的小錐形瓶里,標記好。
這是目前看起來最有可能含有目標蛋白的餾分。
后續更高鹽濃度的洗脫,收集到的液體又逐漸變得清亮稀少。
洗脫結束,層析柱旁擺了一排標記著不同編號的試管和兩個小錐形瓶。
實驗最耗時的部分完成了,但最關鍵的一步還在后面,檢測這些餾分中,是否真的含有具有凝血活性的因子viii。
活性測定需要用到經過處理的、缺乏因子viii的血漿和凝血酶原時間測定。
又是一系列精細而容易出錯的操作。
老吳主動承擔了部分測定工作,他的手法雖然不如沈慕在某些步驟上那么行云流水,但勝在經驗豐富,沉穩老練。
小孫負責準備試劑和記錄數據。
沈慕則統籌全局,同時進行最關鍵的幾個反應步驟的觀察和計時。
時間一分一秒過去,檢驗科里只剩下器皿碰撞的輕響,筆尖劃過紙張的沙沙聲,以及三人偶爾極低的交流。
“陰性對照,凝固時間超過300秒……”
“陽性對照,凝固時間約45秒……”
“餾分9號……無明顯縮短……”
“餾分10號……稍微有點變化?但不明顯……”
“餾分11+12合并樣……”沈慕的聲音微微頓了一下,所有目光都集中在她手中的秒表和正在水浴中溫育的反應管上。
秒針噠噠走著。
30秒……
40秒……
50秒……
試管中的混合液,原本應該保持液態,此刻,卻以肉眼可見的速度,開始變得粘稠,出現極其細微的、正在形成的膠凍狀凝塊!
“凝固了!”小孫忍不住低呼出聲,聲音帶著壓抑不住的激動:“真的凝固了!比陽性對照慢一點,但是……但是真的有效!”
老吳立刻湊過來看,臉上嚴肅的表情終于裂開一道縫隙,眼鏡片后的眼睛里閃過難以置信和一絲激動。
接過沈慕手中的反應管,輕輕傾斜,觀察凝塊的牢固程度。
“凝血時間……大約85秒。”他報出數據,聲音有些干澀:“活性……雖然遠比不上標準品,但確實有!真的有凝血活性!”
沈慕看著那管中已然凝固的膠狀物,又看了看旁邊記錄本上清晰的數據,胸腔里那顆一直懸著的心,終于沉沉地落回了實處。
一股巨大的、混雜著疲憊、欣慰和激動的情緒涌了上來,讓她眼眶微微發熱。
他們做到了。
在這簡陋到極致的條件下,用陳舊的器材,近乎失效的填料,和有限的血漿樣本,真的分離出了具有凝血活性的部分!