沈慕顏的話總是能在看似無望的境地里,指出一點可行的方向。
老吳沉默了一下,點頭:“也行。死馬當活馬醫。小孫,去準備點氫氧化鈉和鹽酸,濃度按……”他看向沈慕顏。
沈慕顏立刻接上:“先用0。5m的naoh處理,再用去離子水洗至中性,接著用0。5m的hcl平衡,最后再用平衡緩沖液充分平衡。我們一步步來,隨時檢測ph和電導。”
小孫聽得有些咋舌,但還是麻利地應了聲好,轉身去準備試劑了。
老吳則開始清洗一些可能用到的玻璃層析柱和管路。
準備工作瑣碎而耗時。
配制溶液,調試ph計,清洗、預處理那包古董deae-纖維素……每一步都需要耐心和細致。
沈慕顏和老吳分工合作,一個負責調配和檢測,一個負責裝填和沖洗,小孫則負責傳遞物品和記錄初步參數。
過程中難免遇到問題。ph計讀數不穩,需要反復校準。
預處理后的纖維素依然有些板結,流速很不理想。
連接管路的硅膠管老化,差點漏液……每當小孫有些焦躁或老吳又開始皺眉搖頭時,沈慕顏總能及時發現問題所在,提出調整方案,語氣始終平穩。
“孫同志,別急,ph計用之前多搖一搖,電極用標準緩沖液多浸泡一會兒。”
“吳老師,流速慢可能是因為裝填太實了,我們卸掉一點,重新用懸浮液慢慢裝,邊裝邊輕輕敲擊柱壁試試。”
“這根硅膠管彈性不行了,孫同志,去器材室問問有沒有稍微新點的,實在不行,我們暫時用這段短的,多接幾個玻璃管過渡。”
沈慕顏的冷靜和專業感染了另外兩人。老吳緊繃的臉色漸漸緩和,甚至在小孫又一次手忙腳亂差點打翻燒杯時,破天荒地沒有斥責,只是嘆了口氣,說了句慢點,看著點。
小孫也在一次次實際操作中,慢慢沉下心來。
旁邊連著用各種長短不一的玻璃管和硅膠管拼湊起來的管路,下面放著用于收集餾分的十幾個試管,排成一列,看起來有些寒酸。
“行了,柱子算是裝好了。”老吳擦了擦額頭的汗,直起有些酸痛的腰:“接下來,就是把昨天分離的那點血漿上清液上樣了。沈醫生,你確定這柱子能掛得住凝血因子viii?別到時候蛋白全流穿了,白忙活一場。”
沈慕顏看著那根簡陋的層析柱,目光沉靜:“理論上,在合適的ph和離子強度下,凝血因子viii應該能結合到deae上。但我們用的填料活性未知,血漿樣本也經過了幾步粗處理,雜質很多。
這次實驗,主要目的是驗證這套我們東拼西湊的層析系統能不能跑起來,觀察蛋白的洗脫行為,收集各個餾分,然后測試有沒有凝血活性。哪怕只得到一丁點兒有活性的部分,就是成功。”
她總是把目標定得實際而清晰,不盲目樂觀,也不輕易氣餒。
“開始吧。”老吳戴上手套,示意小孫準備好記錄本和筆。
沈慕顏深吸一口氣,拿起那個裝著經過初步離心和冷沉淀處理的血漿上清液的小燒杯,小心地、緩慢地,將其加注到層析柱頂端的樣品池中。
淡黃色、略顯渾濁的液體,慢慢滲入白色的填料層。
所有人的目光都緊緊盯著柱子下端出口。
一秒,兩秒……淡黃色的液體開始一滴滴地,極其緩慢地,滴入第一個試管中。
“流速太慢了!”小孫忍不住低呼。
“填料阻力大,正常。”沈慕顏語氣平穩:“記下開始時間,吳老師,我們準備切換平衡緩沖液,開始洗脫。”
老吳點點頭,拿起另一個裝著預先配好,低離子強度緩沖液的瓶子,準備在樣品液全部進入填料后接上。
時間在寂靜而專注的等待中一分一秒過去。